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本试剂盒适用于培养的细胞或从组织中提取出的线粒体的膜电位检测。


罗丹明123(Rhodamine 123)是一种可透过细胞膜的阳离子荧光染料，是一种线粒体跨膜电位的指示剂。它可以快速通过细胞膜，仅需几分钟就可以被具有活性的线粒体所俘获，并且对细胞没有任何毒性。其最大激发波长为507nm，最大发射波长为529nm。在荧光显微镜下观察，呈现黄绿色荧光，也可用荧光光度计或流式细胞仪检测，通过荧光信号的强弱来检测线粒体膜电位的变化和凋亡的发生。

组分	规格	保存
罗丹明123染液(1mg/mL)	1mL	-20℃，避光
5×Assays Buffer	20mL	2～8℃

保存：-20℃，避光，有效期1年。

1. 流式细胞仪、荧光光度计或荧光显微镜：激发波长488～505nm，发射波长515～575nm (一般为530nm)；
   
2. 线粒体提取试剂及仪器；
   
3. 5% CO₂细胞培养箱、微量移液器、1.5mL Microtube、载玻片。

1×Assays Buffer工作液配制：用前将5×Assays Buffer用双蒸水稀释5倍。

1. 细胞染色及分析
   
   1. 培养细胞1×10⁶/mL重悬于培养基中；
      
   2. 加入罗丹明123染液0.1μg/mL～50μg/mL(根椐细胞种类不同而浓度不同，一般3～10μg/mL)；
      
   3. 37℃，5% CO₂细胞培养箱孵育1～30min(根椐细胞种类不同而不同，一般10min)；
      
   4. 离心以培养基洗细胞两次；
      
   5. 重悬细胞于培养基中，37℃，5% CO₂培养60min；
      
   6. 流式细胞仪检测：激发波长488～505nm，发射波长515～575nm (一般为530nm)；
      荧光显微镜观察：滴加100μL上述混合液于载玻片上，激发滤光片波长488nm，阻断滤光片波长515nm观察，拍照。
2. 组织提取的线粒体染色及分析
   
   1. 按常规方法提取的线粒体，用适量的1×Assays Buffer(将5×Assays Buffer用双蒸水稀释5倍)重悬；
      
   2. 常规方法进行蛋白含量测定后，用1×Assays Buffer调配成3mg/mL的线粒体溶液；
      
   3. 取2mL 1×Assays Buffer和1mL线粒体溶液；
      
   4. 加入适量待测化合物(同时设空白对照组)，25℃保温3min；
      
   5. 加入罗丹明123染液10μL；
      
   6. 荧光光度计检测：上述混合液全部加入石英比色皿中，置于25℃下测定，激发波长488～505nm，发射波长530nm，连续记录从0min～30min内荧光强度的变化。

相关搜索：罗丹明123染色试剂盒，Rhodamine 123 Staining Kit